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色谱柱使用过程中,如何冲洗或反冲?
点击次数:143 发布时间:2019-07-11 打印本页面 返回
   色谱柱在液相系统中起着分离的作用,是液相色谱系统的核心部件之一。柱管材质有玻璃、不锈钢、铝铜、peek以及内衬光滑的聚合材料的其他材质。一般细粒度的填料采用匀浆填充法装柱,先将填料调成匀浆,在高压泵作用下,快速将其压入装有洗脱液的色谱柱内,经冲洗后备用。
  色谱柱使用过程中,如果压力升高,或出现污染,选择适当的条件冲洗或反冲。
  1.适用于C18、C8、C4、C1、苯基、PFP、AQ等
  使用至少20倍柱体积的含有≥30%谁的极性邮寄溶剂(如乙腈)作为流动相除去柱子中的缓冲盐;使用至少20倍柱体积的含有95%极性邮寄溶剂(如乙腈)冲洗色谱柱。
  污染物的去除常规星期后柱校没有明显恢复时,使用50%异丙醇/乙腈以低流速清洗20倍柱体积以除去污染物。
  2.适用于氨基柱、氰基柱
  常规清洗:乙腈:水=60:40条件对色谱柱进行冲洗,清洗时不建议水相比例超过40%,过高使用水相容易导致键和相水解。
  色谱柱再生:当色谱柱经过长期使用,柱校降低时,可以对色谱柱进行再生,乙腈:水(水中加入0.05%氨水)=60:40条件冲洗30倍柱体积。
  3.适用于离子交换柱SCX、SAX冲洗方法
  日常冲洗:用100%水冲洗30个柱体积除盐,然后用20%甲醇或乙腈冲洗20个柱体积后保存在20%甲醇或乙腈中。
  长期保存:用100%水冲洗30个柱体积去除盐,然后用50%乙腈;50%水冲洗20个柱体积后保存在50%乙腈:50%水中。
  再生:先用高浓度的缓冲盐(不超过1M),然后再用100%水洗,100%乙腈或甲醇冲洗,再用20%乙腈或甲醇保存。(以上操作可根据实验室自身SOP视情况而定)
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