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纯水色谱柱,耐受原理知一二
点击次数:253 发布时间:2020-01-17 打印本页面 返回

 

 

哈哈,看到月旭的色谱柱给老师们解决了实验问题,小编心里真是很乐滋滋呢~月旭的AQ色谱柱也是可以耐受100%纯水相的色谱柱,对强极性化合物的保留的确很不错的。那么对于常见的反相C18色谱柱,能够耐受100%水相的还有哪些呢?耐受的原理又是如何呢?今天就跟小编一起来了解一下吧~

 

疏水基团低键合密度

 

我们都知道,反相C18色谱柱在保留时,水相比例一般不宜大于90%,而极性化合物在C18柱上的保留行为较弱,有时甚至有机相比例降至5%也没有很好的保留,但过高比例的水相易使C18链发生蜷缩,得不到充分的润湿和舒展,大大降低C18色谱柱的保留能力。像上面对话中老师用到的月旭Ultimate® AQ-C18色谱柱,就是通过降低疏水基团(即C18)的键合密度,最da程度降低C18链的坍缩,从而最大限度地增加极性化合物的保留。月旭Ultimate® AQ -C18色谱柱在高含水量的流动相中,对有机酸、核苷等水溶性强极性化合物具有较好的保留能力。

 

图1 Ultimate® AQ-C18色谱柱分离6种有机酸

 

图2 Ultimate® AQ-C18色谱柱分离5种核苷酸

 

侧链基团位阻

 

普通C18链对于水相的不耐受还体现在高比例水相或盐相下,键合相易受到水分子或盐分子的作用从而造成键合相水解脱落。对于这一作用,月旭科技的Ultimate® LP-C18则完美的解决了该问题。通过在C18烷基侧链引入较大的官能团,其空间立体效应阻碍了流动相分子对键合相硅氧键的作用。同时,由于Ultimate® LP-C18的未封尾特性,使得该系列色谱柱在酸性条件下(pH可低至0.5)依旧拥有极好的耐受能力。

 

图3 月旭Ultimate® LP系列色谱柱键合相示意图

 

封尾工艺

 

常见的C18色谱柱都是使用三甲基氯硅烷封尾试剂来对色谱柱进行封尾,而如果使用含有极性官能团,或含有亲水端基的封尾试剂进行封尾,就能够很好地改善与100%水相的兼容性,同时,由于加入了极性亲水基团,取代了大量的硅醇基位点,在分析碱性化合物的时候能有效防止碱性化合物与硅醇基的相互作用,改善峰形。月旭Ultimate®ODS-3色谱柱,月旭Ultimate® ALK-C18色谱柱等,就是采用的该键合工艺。

 

图4 极性亲水基团试剂封尾工艺

 

极性基团嵌入

 

给色谱柱键合相嵌入极性基团的作用原理类似于极性基团封尾,区别是极性基团加入的位置是嵌入到C18链中。极性嵌入基团有利于增加水分子在烷基链表面的浓度,提高对极性化合物的保留,及水相的耐受,例如月旭Ultimate® Polar-RP色谱柱。

 

图5 极性嵌入基团C18柱

 

极性官能团的嵌入,也可以通过氢键作用,将硅羟基或解离的硅氧负离子屏蔽起来(见下图),进而保证碱性化合物的峰形。

图6 月旭Ultimate® Polar-RP内嵌极性官能团对硅氧负离子的屏蔽作用

 

这样看来,分析极性亲水化合物的时候,可耐受纯水的色谱柱真是优势明显呢,难怪老师们对月旭的色谱柱赞美有加了。耐受纯水的色谱柱由于上述种种工艺的不同,有时在方法开发的时候还能提供不一样的保留特性,使得许多分离复杂极性样品的问题迎刃而解。

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