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高效液相色谱柱的五大填装方法
点击次数:101 发布时间:2019-10-27 返回
 高效液相色谱柱的五大填装方法
高压匀浆法装填
将填料悬浮在适宜的匀浆液中制成匀浆,在其尚未沉降之前,很快以高压泵将其以很高 的流速压进柱中,便可制备出填充均匀的柱子。这是常见的分析和制备色谱柱的装填方法。
 
湿法装填
对于高效柱、特别是现在流行的以3-10μm细柱径填料填装的高效分析柱,则必须使用湿法,即匀浆法装柱。因为,随着粒径的缩小,因静电作用和表面能的加大,粒子间倾向于聚集和“粘结”,若以干法填装,它们会粘附在连接管及柱壁上,也会因强烈的静电作用彼此排斥,因而难以填装出均匀而紧密的柱床。这样,必须改以湿法装填,即将填料悬浮于适宜的液体中消除上述不良作用。但是,在固 - 液系统中仍然存在因重力而引起的沉降现象。
 
干法装填
对于粒径较大的填料,可以用干法装填,其基本方法与填装气相色谱柱类似。但需注意的一点是,在干法填装制备高效液相色谱柱时,不要过分剧烈地振动和敲打。振动和敲打会使填料因自身粒径的不均匀性而产生柱子整体上的不均一性,即较大的填料粒子靠近柱壁,而较细粒径者则倾向集中于柱中心。这种柱内颗粒分布的不均匀性,会导致柱效的降低。比较好的方法是采用小量多次的方法向柱内加入填料,例如每次加入相当于3-5mm柱床的填料,装一点即在实验台或桌面上垂直地轻轻磕几十下,续加一些填料后,重复上述操作,直至填装完成。
 
等密度法装填
在HPLC发展的早期,常采用“等密度法”来填装高效柱。多孔硅胶的骨架密度较高。不同牌号的硅胶因制法不同而有差异,但多在2.2g/cm3以上。因此,需以高密度溶剂配制密度与硅胶骨架密度相近的混合液。常使用的高密度溶剂为碘代和溴代烷类,再与适当比例的其他溶剂相配,配制出具有密度适宜的液体,使填料能呈“失重”状态悬浮于匀浆液中,以从容地用高压泵将其压入空色谱柱中,制出填装均匀的高效色谱柱。
 
高粘度法装填
高粘度法,即使用黏度较高的匀浆液体系以阻止颗粒的沉降?梢圆捎靡叶、聚乙二醇、甘油以及石蜡油等高黏度液体调配匀浆液。但是,高黏度导致流体阻力加大,必将延长装柱时间且需使用更高的装柱压力,在实用上很不方便。因此,高黏度法已很少被采用。
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